支原体(霉形体)的培养技巧支原体是介于病毒与细菌之间的一类微生物,在自然界广泛存在,使人和多种动物、植物害病。
它缺乏细胞壁而不同于细菌,能在无细胞培养基生长繁殖,并含有RNA和DNA而有别于病毒。支原体以二分裂方式繁殖,基本形态为圆形、丝状形,后者易形成分枝状菌丝,因而得名支原体。其大小介于病毒和细菌之间,zui小直径125-250nm,可通过滤器。基因组小只5×108道尔顿,是已知能自行复制繁殖的原核生物中zui小的,因而生物合成能力低,体外培养时需要富含营养,如血清、酵母浸液、核酸等复杂成分的培养基才能生长。它生长缓慢,倍增时间1-6小时,zui长需三周才形成菌落。菌落中心长入琼脂内部形成中央较密的核,从上方观察可见“煎蛋样”的特殊菌落,因为菌落很小需在低倍镜下才能看见。Mp从发酵葡萄糖取得生长所需能量。Uu则是通过水解尿素获得能量。支原体对抑制细胞壁合成的青霉类抗生素不敏感,对抑制蛋白质合成的抗生素如四环素和大环内酯类抗生素的红霉素等敏感。
一般培养比较多的是肺炎支原体(MP),解脲脲原体(UU)是耐酸不耐碱的,UU培养的原理是在于其菌体中含有脲酶,而UU培养基中含有尿素,UU的生长需要其本身的脲酶分解尿素益提供其自身生长所需要的营养物质,UU培养基中含有指示剂酚红,由于尿素被分解释放出氨从而使培养基变碱而使培养基由黄变红,但是这种红是一种清亮的红色,透明澄清无浑浊,UU其适宜的PH值为6.2-6.5,由于尿素分解产氨是PH上升,UU在PH值大于7的条件下会迅速死亡,因此,在培养时要随时观察其液体培养基的PH值,一旦看到培养基变红,要立即取出,以防培养基PH上升导致UU死亡,一般UU需要在培养至对数生长期时是活力zui强的时候(培养基呈橙红色变化)。一般UU生长需要24小时。